關(guān)鍵詞：蘋果輪紋病菌 果膠裂解酶 基因敲除 

摘要：由葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)引起的蘋果輪紋病是影響我國蘋果安全生產(chǎn)的重大病害之一。因此,本研究基于受蘋果輪紋菌侵染的蘋果組織中果膠裂解酶基因Bdpl1表達(dá)上調(diào)這一現(xiàn)象,通過Split-marker PCR技術(shù)構(gòu)建Bdpl1基因敲除載體,并通過PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化獲得轉(zhuǎn)化子,經(jīng)常規(guī)PCR和qRT-PCR對所獲得的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行篩選,成功獲得1個(gè)Bdpl1基因缺失陽性突變子。該轉(zhuǎn)化子在PDA上的培養(yǎng)基性狀與野生型沒有明顯差異,但在果膠培養(yǎng)基上菌落直徑明顯小于野生型。其胞外果膠酶活相比野生型明顯下降,但在離體'早富'蘋果枝條上的致病力并沒有明顯的下降。通過qRT-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)在基因Bdpl1敲除后,其家族內(nèi)有3個(gè)基因在病菌侵染過程中相比野生型明顯上調(diào)表達(dá)(>3倍)。這些現(xiàn)象表明果膠裂解酶基因Bdpl1與病原菌的營養(yǎng)生長過程關(guān)系不大,但其參與對寄主果膠類物質(zhì)的降解。Bdpl1基因?qū)喖y病菌致病力的影響較小,有可能是Bdpl1基因敲除后,該基因家族內(nèi)其他基因的上調(diào)表達(dá)補(bǔ)償了Bdpl1基因的功能。

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